نمونه­های استافیلوکوکوس که از عفونت­های بالینی جداسازی شده باشند، باید به روش­های رقیق سازی در آبگوشت و یا انتشار از دیسک مورد بررسی قرار بگیرند. مقاومت در برابر پنی سیلین G بر اساس مثبت بودن تست بتالاکتاماز قابل پیش ­بینی خواهد بود؛ تقریبا ۹۰% از سویه­های استافیلوکوکوس اورئوس، آنزیم بتالاکتاماز را تولید می­ کنند. مقاومت در برابر نافسیلین (اگزاسیلین و متی سیلین)، در حدود ۳۵% از نمونه­های استافیلوکوکوس اورئوس و تقریبا در ۷۵% از نمونه­های استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس، دیده می­ شود. مقاومت در برابر نافسیلین با حضور ژن mecA ارتباط دارد. این ژن یک پروتئین متصل شونده به پنی سیلین (PBP2a[29]) را کد می­ کند که نافسیلین روی این ژن تاثیری ندارد. ژن mecA در روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز قابل شناسایی است. اغلب آزمایشگاه­های بالینی از یک روش فنوتیپی از قبیل کشت در محیط آگار غربال کننده اگزاسیلین، استفاده می­ کنند. استافیلوکوکوس­هایی که در آگار مولر- هینتون حاوی ۴% نمک و g/mlμ۶ اگزاسیلین رشد کرده باشند، به طور شاخص از نظر mecA مثبت بوده و مقاوم به نافسیلین هستند. به گونه ­ای جایگزین، روشی برای سنجش محصول ژن mecA، پروتئین PBP2a در شکل تجارتی در دسترس است که نسبت به روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز برای ژن mecA و یا نسبت به آزمون بررسی مقاومت به روش کشت باکتری در محیط آگار نمک دار حاوی اگزاسیلین، بسیار سریع تر است (بروکس و همکاران، ۲۰۱۰).
پایان نامه - مقاله - پروژه
۷-۱۵-۲- تست­های سرمی و تعیین تیپ:
تست­های سرمی که برای تشخیص عفونت­های حاصل از استافیلوکوکوس اورئوس، باشند ارزش کاربردی محدود دارند. روش تعیین تیپ مولکولی در ثابت کردن انتشار کلون­های اپیدمیک تولیدکننده بیماری-های حاصل از استافیلوکوکوس اورئوس مورد استفاده قرار گرفته اند. الکتروفورز ژل پالس- فیلد[۳۰] و تعیین تیپ سکانس مولتی لوکوس[۳۱]، قدرت تمایزدهندگی بالایی دارند (بروکس وهمکاران، ۲۰۱۰).
مواد و روش­ها
۱-۳- مواد و وسایل مورد نیاز:
الف) مواد مصرفی برای کشت استافیلوکوکوس
محیط آگار حاوی خون گوسفند
محیط آگار حاوی خون خرگوش
محیط آگار حاوی خون اسب
محیط مانیتول سالت آگار
محیط نوترینت آگار
محیط مولر - هینتون براث
محیط TSB[32]
پلاسمای خرگوش
ب) وسایل مصرفی برای استخراج DNA
سمپلر ۱۰۰۰ میکرولیتری
سمپلر ۱۰۰ میکرولیتری
سر سمپلر آبی، زرد و سفید
لوله اپندورف
ج) محلول های مصرفی برای استخراج DNA
محلول TE[33] (۱۰mM Tris-HCl , pH=8.1 mM EDTA)
محلول SDS[34] ۱۰ درصد(Roche, Germany)
پروتئیناز K (Fermentas, Germany, 20 mg/ml)
محلول NaCl 5 مولار (Merck)
محلول (CTAB[35]10 % ,NaCl 0.6 M) CTAB/NaCl
محلول فنل/ کلروفرم/ ایزو آمیل الکل (۲۵-۲۴-۱)، که این مواد به صورت یک حجم ایزو آمیل الکل، ۲۴ حجم کلروفرم و ۲۵ حجم فنل ترکیب شدند.
لیزوزیم (μg/ml 30)
ایزوپروپانول خالص (Merck)
اتانول ۷۰ درصد سرد
د) مواد مصرفی برای انجام واکنش زنجیره­ای پلیمراز
dNTPs(Mμ۵۰، سیناژن)
(۷۵mM Tris-HCl, pH 9.0, 2mM MgCl2, 50mM KCl, 20mM [NH4]2SO4) PCRbuffer
Taq DNA Polymeras (سیناژن)
MgCl2 (سیناژن)
پرایمر R (سیناژن)
پرایمر F (سیناژن)
آب مقطر غیر یونیزه (مخصوص واکنش زنجیره­ای پلیمراز )
ﻫ) مواد مصرفی برای الکتروفورز
ژل آگارز (Agarose, Merck, Germany)
اتیدیوم بروماید۱۰mg/ml
مارکر (Gene Ruler TM 100 bp DNA Ladder SMO331 & Fermentas, Germany)
بافر بارگذار[۳۶] (۶X Loading solution GBX8 & Fermentas, Germany)
Merck, Germany) 10X TAE[37] Buffer)
۱X TAE
و) دستگاه­های مورد استفاده
دستگاه واکنش زنجیره­ای پلیمراز (Bio - RAD)
دستگاه UV ترانس ایلومیناتور(BTS-20, Japan)
دستگاه الکتروفورز (Paya pajoohesh pars, Iran)

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...