• Ratio min (Au)= 0.100 Wave Length = 254 nm

• Filter type = Hamming

• Minimum Area = 15000

• Minimum Hight = 1000

• Threshold = 100

سپس بر اساس تطابق زمان ماندگاری (Retention time) نمونه‌های مجهول با نمونه های استاندارد، هیستامین را شناسایی کرده و با توجه به سطح زیر منحنی پیک‌ها با توجه به منحنی‌های استاندارد مربوطه تعیین غلظت شدند.
۲-۴-۴-۵ بازیافت^[۶۰]
از این فاکتور به منظور معتبر سازی^[۶۱] روش های آنالیز استفاده می‌شود. بدین صورت که به نمونه‌های مورد آزمون مقدار معینی از ماده قابل اندازه گیری اضافه کرده و تحت شرایط آزمایش استخراج تصفیه و تزریق می‌نماییم از روی تعداد این آزمونهای بازیافت می‌توان دقت، صحت و تکرار پذیری روش آنالیز را که منجر به معتبر سازی آن می‌گردد محاسبه نمود. از طرفی از بازیافت می توان نتایج آزمون را نیز بر حسب درصد بدست آمده از پارامتر بازیافت اصلاح نمود.
در این تحقیق نیز موارد اصلاح نتایج با اندازه گیری بازیافت به شکل زیر انجام شد :
۵۰ گرم گوشت ماهی در چهار سطح مختلف ۱، ۲، ۵، ۱۰ میکروگرم در گرم با بهره گرفتن از استاندارد خالص آلوده شدند و طبق شرایط آزمایش، بندهای ۲-۴-۴-۲ تا ۲-۴-۴-۴ استخراج، مشتق سازی و به عنوان نمونه نامشخص مورد آنالیز دستگاهی قرار گرفتند پس از اندازه گیری میزان آمین‌های نمونه، طبق استانداردهای رسم شده، با کسر آمین موجود در ماهی مورد آزمون که یک نمونه هم بدون اضافه کردن، آمین، به عنوان نمونه شاهد مورد آنالیز قرار گرفته بود درصد بازیافت محاسبه شد ( طبق فرمول زیر) از این بین آنهایی که بین ۵۰ تا ۱۲۰ درصد بدست آمده بودند انتخاب و میانگین آنها تعیین گردید که در جدول نهایی نتایج در مقدار نمونه‌ها تاثیر داده شد و میزان واقعی آمین‌های موجود در نمونه‌های اصلی با احتساب آن اصلاح گردید.
مقدار نمونه شاهد- عدد بدست آمده از بازیافت
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
سطح آلودگی مورد نظر
درصد بازیافت=
۱۰۰*
۲-۵- تجزیه وتحلیل آماری
تجزیه وتحلیل آماری داده‌های حاصل از شاخص‌های شیمیایی و میکروبیولوژیکی کیفیت با نرم افزار SPSS انجام پذیرفت. روش تجزیه واریانس یکطرفه جهت بررسی وجود یا عدم وجود اختلاف معنی دار در سطح ۹۵ درصد بین مقادیر حاصل از هر شاخص در زمان های صفر، ۳، ۶، ۹، ۱۲، ۱۵ و ۱۸ روز به کار رفت. همچنین جهت تعیین دقیق وجود یا عدم وجود تفاوت معنی‌دار بین تیمارهای مختلف زمانی مورد آزمایش از آزمون حداقل تفاوت معنی دار^[۶۲] استفاده شد. برای تعیین ارتباط بین فاکتورهای شیمیایی و میکروبیولوژیکی و همچنین زمان نگهداری از آزمون رگرسیون خطی استفاده شد و معادله رگرسیونی آنها بدست آمد.

فصل سوم
نتایج
۳-۱- نتایج کار دستگاهی
کروماتوگرام نمونه‌های استاندارد تری‌متیل آمین و هیستامین در شکل ۳-۱ و ۳-۲ ارائه شده است. منحنی استاندارد تری‌متیل آمین بر اساس غلظت‌های (۰، ۵، ۱۰، ۱۵، ۲۰، ۲۵، ۳۰) بر حسب میکروگرم در گرم در مشاهده با طول‌ موج‌های بدست آمده بوسیله دستگاه اسپکتروفتومتر از هر غلظت با میانگین سه تکرار بدست آمد و با توجه به منحنی استاندارد رسم شده و رابطه۲-۱ میزان تری‌متیل آمین در نمونه‌های مجهول برحسب TMA mg/100g محاسبه شد. در مورد هیستامین زمان پیک های مورد نظر و فاصله آنها اساس شناسایی پیک های حاصل از کروماتوگرام نمونه‌ها قرار گرفت. منحنی استاندارد هیستامین بر اساس غلظت‌های ۱۰، ۱۵ و ۲۰ میکروگرم در سی‌سی با میانگین سه تکرار محاسبه شد. منحنی کالیبراسیون هیستامین به روش خطی با حداقل مربعات رسم شد که در نمودار آن به همراه معادله خطی و ضریب رگرسیون آن آورده شده است.
شکل ۳-۱- منحنی استاندارد تری‌متیل‌آمین
شکل ۳- ۲- منحنی استاندارد هیستامین
۳-۲- نتایج آزمایشگاهی
مقادیر شاخص‌های شیمیایی کنترل کیفیت (هیستامین، تری‌متیل آمین و pH) به همراه نتایج میکروبیولوژیکی (بار باکتری‌های سرمادوست و مزوفیل) در نمونه‌های ماهی هامور معمولی Epinephelus coioides نگهداری شده در یخ (مربوط به روزهای صفر، ۳، ۶، ۹، ۱۲، ۱۵، و۱۸) به ترتیب درجداول۳-۱ و۳-۲ و نیز روند تغییرات و مقایسه شاخص‌های شیمیایی و میکروبی کنترل کیفیت با یکدیگر در نمودارهای مربوطه آورده شده‌اند.
۳-۲-۱- نتایج شاخص‌های شیمیایی کنترل کیفیت
در این مطالعه از بین شاخص‌های شیمیایی کنترل کیفیت، روند تغییرات سه شاخص شامل هیستامین، تری‌متیل‌آمین و pH در نمونه ماهیان هامور معمولی نگهداری شده در یخ مورد بررسی قرار گرفتند.
جدول ۳-۱- مقادیر شاخص‌های شیمیایی کیفیت در ماهی هامور معمولی Epinephelus coioides در روزهای مختلف نگهداری در یخ

PH*
تری‌متیل‌آمین*
هیستامین*
شاخص‌های شیمیایی
روز

۰۵/۰± ۸۵/۵
a
۰۴/۰± ۹۶/۰
a
ND**
a
صفر

۰۳/۰± ۴۰/۶
b