۹۵˚C

۱۰ دقیقه

Denaturation

۹۵˚C

۱۵ ثانیه

Data Collection

۶۰˚C

۳۰ ثانیه

شکل ۳-۱. نمایی از برنامه دمایی دستگاه مورد استفاده

۳-۶-۱. تجزیه و تحلیل نتایج بدست آمده از Real-Time PCR:

پس از بررسی داده های ابتدایی شامل نتایج تکثیر نمونه ها در ۷۵۰۰ software system ver.2.0 سیکل آستانه نمونه ها استخراج شد و نتایج با بهره گرفتن از روش زیر آنالیز شد.

در این فرمول منظور از (CT) سیکل آستانه، E بازده پرایمرها، target ژن مورد بررسی، ref ژن خانه دار، sample نمونه توموری و control نمونه مجاور تومور است.
تعیین بیان ژنهای مورد نظر در بافت تومور و مجاور تومور با تفاضل سیکل آستانه این ژن و ژن خانه دار(ctACTB) در بافت توموری و مجاور تومور تعیین می شود. سپس با بهره گرفتن از فرمول بالامقدار نهایی آن محاسبه می شود. با توجه به تعریفات در نرم افزار ۷۵۰۰ software system ver.2.0 تفاوتهای کمتر و مساوی نیم سیکل به عنوان عدم تفاوت در نظر گرفته می شود و کاهش یا افزایش سیکل بیش از این میزان به عنوان کاهش و افزایش بیان در نظر گرفته می شود. درنهایت معنی دار بودن این اعداد با تست آماری مشخص می شود. هنگام آنالیز داده های بیان ژن دو سری اطلاعات بدست می آید که از طریق آن می توان به میزان بیان ژن پی برد. یکی تفاوت چرخه های آستانه است که طبق فرمول DCt به دست می آید. بر این اساس اگر این تفاوت که با ژن مرجع محاسبه می شود منفی باشد افزایش بیان( یعنیCt در ژن مورد نظر از ژن مرجع کمتر یعنی بیان ژن مورد نظر بیشتر است )و اگر این تفاوت مثبت باشد کاهش بیان ژن خواهیم داشت. دیگری عدد خالص تغییرات بیان ژن است® که بر اساس فرمول DDCt و در حقیقت از همان پارامتر DCt به دست می آید. بر طبق این فرمول عدد به دست آمده میزان بیان ژن مورد نظر در بافت توموری نسبت به بافت مجاور تومور پس از در نظر گرفتن تغییرات ژن خانه دار است. در این مطالعه ژن بتااکتین((ACTB به عنوان کنترل داخلی در نظر گرفته شد.

۳-۷. نحوه تجزیه و تحلیل داده ها:

تجزیه و تحلیل داده ها به صورت توصیفی و تحلیلی با بهره گرفتن از نرم افزار SPSS Ver20صورت گرفت. در این نرم افزار برای مقایسه میزان بیان تومور مارکرها در بافت سالم و تومورال از Paired Sample Student T Test استفاده گردید. در مورد مقایسه کیفی (وجود یا عدم وجود بیان) نیز از آزمون McNemar استفاده شد.

فصل چهارم: نتایج و یافته ها

۴-۱. اطلاعات دموگرافیک جمعیت مورد مطالعه

اطلاعات دموگرافیک مربوط به نمونه های مورد استفاده در جدول ۴-۱ آمده است. میانگین سن افراد مربوط ۱.۷۱۳± ۴۹.۱۶ بود. به ترتیب ۵۰ و ۴۱.۳ درصد از لحاظER و PR مثبت بودند.
جدول ۴-۱. خلاصه ای از اطلاعات دموگرافیک.

ویژگی

درصد

سن

Mean

۱.۷۱۳± ۴۹.۱۶

Range

۷۴-۲۹

Stage بیماری

I

۱۱.۶

II

۴۵.۶